線粒體是細(xì)胞超氧化物的主要生產(chǎn)者。低中等水平的超氧化物的產(chǎn)生對(duì)于許多重要細(xì)胞過(guò)程的適當(dāng)調(diào)節(jié)至關(guān)重要，這些過(guò)程包括基因表達(dá)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和肌肉對(duì)耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的適應(yīng)性。不受控制的線粒體超氧化物的產(chǎn)生會(huì)觸發(fā)細(xì)胞氧化損傷，從而導(dǎo)致多種疾病的發(fā)病機(jī)理，包括癌癥，心血管疾病，神經(jīng)退行性疾病和衰老。熒光法線粒體過(guò)氧化物檢測(cè)試劑盒 使用我們*的超氧化物指示劑來(lái)定量活細(xì)胞中的超氧化物水平。MitoROS 580具有活細(xì)胞滲透性，可以快速，選擇性地靶向線粒體中的超氧化物。與超氧化物反應(yīng)時(shí)會(huì)生成紅色熒光。該試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光測(cè)定法，可在培養(yǎng)一小時(shí)后檢測(cè)活細(xì)胞中的線粒體超氧化物。該試劑盒可用于熒光酶標(biāo)儀和熒光顯微鏡應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的 熒光法線粒體過(guò)氧化物檢測(cè)試劑盒 。
適用儀器
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 590 nm |
| Cutoff： | 570 nm |
| 推薦孔板: | 黑色透明底板 |
| 讀取模式: | 底部讀取 |
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中準(zhǔn)備細(xì)胞
用測(cè)試化合物處理細(xì)胞以誘導(dǎo)超氧化物
添加MitoROS 580工作溶液
在37°C下將細(xì)胞染色30-60分鐘
檢測(cè)Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處的熒光增加（底部讀取模式）或使用配備TRITC濾光片的熒光顯微鏡
溶液配制
儲(chǔ)備溶液配制
MitoROS 580儲(chǔ)備溶液（500X）：將50 µL DMSO（組分C）添加到MitoROS 580（組分A）的小瓶中，并充分混合以制成500X MitoROS 580儲(chǔ)備液，避光。 注意：25 µL 500X MitoROS 580儲(chǔ)備溶液足以用于1個(gè)板。 為了存放，請(qǐng)將管子緊緊密封。
工作溶液配制
將25μL的500X MitoROS 580儲(chǔ)備溶液添加到10 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成MitoROS 580工作溶液。 注意：此MitoROS 580工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)步驟
在所需的緩沖液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X測(cè)試化合物（96孔板）或5 µL 5X測(cè)試化合物（384孔板）處理細(xì)胞。 對(duì)于對(duì)照孔（未處理的細(xì)胞），添加相應(yīng)量的化合物緩沖液。
為了誘導(dǎo)超氧化物，將細(xì)胞板在37°C下孵育所需的時(shí)間，避光。 注意：我們?cè)?7°C下用50 µM抗霉suA（AMA）處理HeLa細(xì)胞30分鐘，以誘導(dǎo)超氧化物。 有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參見(jiàn)圖1。
將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的MitoROS 580工作溶液添加到細(xì)胞板中。
將細(xì)胞在37°C下孵育30至60分鐘。
使用熒光酶標(biāo)儀（Ext / Em = 540/590 nm（Cutoff = 570 m））檢測(cè)熒光強(qiáng)度，或者使用帶有TRITC濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
